5×蛋白上樣緩衝液(配β-巰基乙醇)
產品組成
產品組成 | 規格 | 儲存溫度 |
5×蛋白上樣緩衝液 | 10ml | 2-8℃ |
β-巰基乙醇 | 1ml | 常溫 |
產品簡介••↟:
本產品適用於SDS-PAGE(SDS變性聚丙烯醯胺凝膠電泳)時作蛋白質上樣用₪₪▩₪✘。其主要成份為SDS◕₪▩↟╃,β-巰基乙醇◕₪▩↟╃,溴酚藍◕₪▩↟╃,緩衝鹽溶液等₪₪▩₪✘。
SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS複合物上帶有大量的負電荷◕₪▩↟╃,這時蛋白質本身的電荷*被SDS掩蓋◕₪▩↟╃,消除了各種蛋白質本身電荷的差異◕₪▩↟╃,SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵◕₪▩↟╃,破壞蛋白質分子的二級和三級結構◕₪▩↟╃,β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵◕₪▩↟╃,破壞蛋白質的四級結構◕₪▩↟╃,消除了蛋白結構之間的差異₪₪▩₪✘。zui終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位)◕₪▩↟╃,電泳速度只是與其分子量大小有關₪₪▩₪✘。溴酚藍用作電泳時的指示劑◕₪▩↟╃,可大概指示電泳結束的時間₪₪▩₪✘。
儲存時間••↟:
未混合前2-8℃可儲存一年◕₪▩↟╃,混合後儲存三個月₪₪▩₪✘。
使用說明••↟:
1. 根據用量◕₪▩↟╃,以每1ml的5×蛋白上樣緩衝液加入50ulβ-巰基乙醇◕₪▩↟╃,混勻₪₪▩₪✘。此即為配好的蛋白上樣緩衝液₪₪▩₪✘。此配好的蛋白上樣緩衝液在2-8℃儲存三個月₪₪▩₪✘。
2. 請按每40微升蛋白樣品加入10ul配好的上樣緩衝液的比例來使用₪₪▩₪✘。如果蛋白濃度過高◕₪▩↟╃,可用雙蒸水稀釋₪₪▩₪✘。
3. 混勻後◕₪▩↟╃,100℃水浴加熱3-5分鐘◕₪▩↟╃,使蛋白變性₪₪▩₪✘。
4. 冷卻到室溫後◕₪▩↟╃,離心數秒後◕₪▩↟╃,混均再離心30秒取上清直接上樣即可₪₪▩₪✘。
注意事項••↟:
β-巰基乙醇味道特別難受◕₪▩↟╃,所有操作是在通風櫃中操作₪₪▩₪✘。如果沒有通風櫃◕₪▩↟╃,也儘量找一通風處操作◕₪▩↟╃,或者使用5×蛋白上樣緩衝液(含DTT)₪₪▩₪✘。
8%膠時溴酚藍大概在30kd左右◕₪▩↟╃, 12%膠時◕₪▩↟╃,約在20kd左右◕₪▩↟╃,15%膠時◕₪▩↟╃,大概在10kd₪₪▩₪✘。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間₪₪▩₪✘。
為了您的安全和健康◕₪▩↟╃,請穿實驗服並戴一次性手套操作₪₪▩₪✘。